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生化實驗室15大常識
標簽 離心機 移液器 ** cc 克隆載體
[導讀] 生化實驗室15大常識。
1.在重蒸酚中為什么加入0.1%的8-羥基喹啉及少量巰基乙醇?
保存在冰箱中的酚，容易被空氣氧化而變成粉紅色，這樣的酚容易降解DNA，一般不可以使用。為了防止酚的氧化，可加入0.1%的8-羥基喹啉及少量巰基乙醇。8-羥基喹啉是帶有淡黃色的固體粉沫，不僅能抗氧化，并在一定程度上能抑制DNase的活性。
2.如何將不同構(gòu)型的質(zhì)粒DNA區(qū)別開?
由于不同構(gòu)型的DNA在瓊脂糖凝膠電泳中的遷移率不同，cccDNA的泳動速度*快，通過凝膠電泳方法可將不同構(gòu)型的DNA區(qū)別開。
3.用酚-氯仿抽提細胞基因組DNA時，通常要在酚-氯仿中加少許異戊醇，為什么?
異戊醇可以降低表面張力，從而減少氣泡產(chǎn)生。另外，異戊醇有助于分相，使離心后的上層含DNA的水相、中間的變性蛋白相及下層有機溶劑相維持穩(wěn)定。
4.用乙醇沉淀DNA時，為什么加入單價的陽離子?
用乙醇沉淀DNA時，通常要在溶液中加入單價的陽離子，如NaCl或NaAc，Na+中和DNA分子上的負電荷，減少DNA分子之間的同性電荷相斥力，而易于聚集沉淀。
5.在提取RNA時經(jīng)常使用異硫氰酸胍，有什么作用?
RNA是一種極易降解的核酸分子。高濃度強變性劑異硫氰酸胍使細胞結(jié)構(gòu)迅速被破壞，使RNA從細胞中釋放出來。同時高濃度異硫氰酸胍還使細胞內(nèi)的RNA酶失活，使釋放出的RNA不被降解。
6.蛋白印跡中封閉液的作用?
封閉液的作用是封閉未吸附蛋白的部位，以減少非特異性結(jié)合背景的影響。常用的封閉液有脫脂奶粉、小牛血清等。
7.DNA通常保存在什么緩沖液中?
采用TE緩沖液，Tris-HCl的緩沖系統(tǒng)，加入EDTA可以螯合二價金屬離子進而抑制依賴于二價金屬離子的DNA酶的活性，對DNA起到保護作用。
8.在酶切反應緩沖液中為什么加入BSA?
通過提高溶液中蛋白質(zhì)的濃度，對酶起保護作用。
9.簡單的克隆載體必需包括什么?
復制起點;選擇標記：主要是抗性基因;多克隆位點：便于外源DNA的插入。
10.用酚抽提細胞DNA時，有什么作用?
使蛋白質(zhì)變性。
11.在分離DNA時，要使用EDTA，為什么?
EDTA是金屬離子螯合劑，螯合二價離子，抑制核酸酶的活性。
12.在分離DNA過程中，造成DNA分子斷裂的因素有哪些?
核酸酶降解;化學降解;物理剪切。
13.使用離心機應注意什么?
首先應該根據(jù)自己的實驗需求選擇合適的離心機和轉(zhuǎn)子以及離心管，使用離心機時的工作轉(zhuǎn)速不應該超過離心機、轉(zhuǎn)子以及離心管的*大允許轉(zhuǎn)速。離心前注意嚴格平衡樣品。安裝轉(zhuǎn)子和轉(zhuǎn)子蓋要規(guī)范、準確。離心時要留人看守，發(fā)現(xiàn)離心機異常應立即關(guān)閉離心機。離心結(jié)束后要安放好轉(zhuǎn)子。
14.分子生物學實驗室常用的**方法有哪些?
高壓蒸汽**、干熱**、化學藥劑**、過濾**。
15.使用移液器有哪些注意事項?
垂直吸液、慢吸慢放;選擇合適的量程范圍，不能超過量程使用;選擇與移液器匹配的槍頭，安裝槍頭時不要用力太猛;移液器每日用完后，應旋到*大刻度。